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【微光譜應用】Ocean HR2吸光度及分辨率測評

更新時間:2023-03-22      點擊次數:990

Ocean HR2光纖光譜儀憑借其專有的CCD陣列探測器和低雜散光光學平臺設計,為從等離子體監測到藥物分析等各種應用提供了優異的光譜性能。本次測試,將聚焦海洋光學HR2光纖光譜儀的吸光度線性度以及高分辨率性能。


關于Ocean HR2


海洋光學Ocean HR2高分辨率光纖光譜儀結構緊湊,堅固耐用,積分時間快至1μs,熱波長穩定性——漂移小于每攝氏度0.06個像素,可在溫度變化時保證可靠的光譜性能。它涵蓋 ~190-1150 nm 內各種波長范圍,可選狹縫尺寸,以幫助用戶控制光通量和光學分辨率。


Ocean HR2光譜儀可與海洋光學光源、附件和軟件兼容,允許用戶針對不同的應用優化。此外,每臺HR2海洋光學光譜儀都配有Ocean Direct,這是個功能強大的跨平臺軟件開發工具包,帶有應用程序編程接口。


吸光度測量:重鉻酸鉀標準品


為測試海洋光學HR2光纖光譜儀的吸光度線性度,測量了重鉻酸鉀吸光度標準品,每種樣品的濃度水平都不同。

測量吸光度實驗包括海洋光學HR2-UV-VIS光譜儀、帶衰減器的DH-2000氘燈光源、兩根400 μm光纖,石英比色皿、Square One比色皿支架和海洋光譜儀軟件OceanView。

圖1.重鉻酸鉀標準品的紫外吸光度

(濃度范圍20.27-100.95 mg/L)


圖1為使用Ocean HR2測得的紫外吸收譜,可看出Ocean HR2出色的低雜散光性能,特別是當繪制與濃度關系時,其吸光度線性度為0.9997(圖2)。

圖2.高吸光度線性度是海洋光學光譜儀HR2的一個特點。


藍色線為重鉻酸鉀標準品的測量結果,基于該標準曲線,可預測該波長范圍內1.5AU以下幾乎任何樣品的濃度。


吸光度測量:牛血清白蛋白BSA


BSA常用作生化應用中的蛋白質濃度標準品。下面使用與重鉻酸鉀實驗相同的Ocean HR2光譜儀配置,在蒸餾水中測量了質量同為503mg的30種不同濃度的BSA。


為確保獲得更佳測量結果,建議在實驗中應注意以下:


測量前,將光譜儀和光源預熱30分鐘。預熱有助于光源達到熱平衡狀態,避免由于光源輸出的微小變化而導致的測量偏差。


采樣時避免取下石英比色皿,因為這樣做可能會引入錯誤。正確的做法是,在比色皿中進行溶液稀釋,使用一次性移液管吸取每個樣品的一部分,然后在去離子水中混合,并對每個樣品重復該過程。


同時,還建議避免測量中移動光纖。

圖3. BSA樣品在 279 nm 處有強烈的吸收峰。


使用BSA測量的吸光度線性度結果甚至比重鉻酸鉀更好。取279 nm處的吸收峰(圖3),吸光度直至2.5AU,也能保證吸光度線線性度0.999(圖4)。這種性能使Ocean HR2成為定量其他類型的蛋白質濃度及生物應用,如分析血液成分和對藥物配方進行質量保證的理想選擇。

圖4. 近30個BSA樣品上測得的吸光度線性度高達0.999。


高分辨率的Ocean HR2:識別譜線


由于光學平臺優化設計,HR2海洋光學光譜儀的分辨率(FWHM)通常小于1nm。例如在測量汞氬燈氣體放射光源時,在UV-VIS波段觀察到很多明確的尖峰(圖5)。

圖5.根據配置,可使用海洋光學光譜儀Ocean HR2實現亞納米級光學分辨率。


在測太陽輻照度時觀察到類似的光學分辨率性能,25μm狹縫的Ocean HR2在其光譜范圍內檢測到光學分辨率小于1.2nm的光譜發射線(圖6)。


采樣配置包括一個連接到600μm VIS-NIR光纖的余弦校正器,該光纖被放置在反射探頭支架中,并以90°對著天空。

圖6. HR2海洋光學光譜儀在太陽輻照度測量中展示了其多功能性。


結語


從檢測等離子體和氣體中的窄發射線到確定蛋白質的濃度,Ocean HR2 光纖光譜儀在實驗室或生產線上提供科研級光譜儀性能,能夠勝任研究或系統集成的苛刻要求。